關(guān)鍵詞:抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界****抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝**，質(zhì)量保證,價(jià)格優(yōu)惠。
抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://www.cdmingchi.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
SSH是一項(xiàng)可以快速獲取兩個(gè)不同生物材料中差異表達(dá)基因的分子生物學(xué)技術(shù)，是快速篩選差異表達(dá)基因的有效方法，也是尋找新基因的重要手段。該技術(shù)尤其適合以genome尚不完全清晰的物種或者以特殊材料為研究對(duì)象的科研工作者。
    基本流程:通過(guò)差減文庫(kù)構(gòu)建，文庫(kù)驗(yàn)證和篩選（逆向斑點(diǎn)雜交），獲得陽(yáng)性克隆，對(duì)陽(yáng)性克隆測(cè)序及生物信息分析，可判定差異基因的情況。另外結(jié)合RACE技術(shù)可進(jìn)一步克隆所獲得的差異基因的cDNA全長(zhǎng)序列，并可用Northern blot 或Real－Time PCR加以驗(yàn)證。
客戶須知：
1. 客戶須在實(shí)驗(yàn)開始前確保其提供材料的數(shù)量和質(zhì)量，并提供相關(guān)信息。
2. 本公司在收到客戶提供的研究材料后會(huì)在**個(gè)工作日起開始服務(wù)工作。
3. 工作完成后，本公司會(huì)將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料。
4. 客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失全部由客戶承擔(dān)。
提供材料具體要求：
客戶可以提供（組織、細(xì)胞或RNA ）。樣品需求量組織（2～ 4g），細(xì)胞（108），總RNA（純化后>200 μg），mRNA （純化后>2 μg ）。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程折疊編輯本段
抑制性消減雜交技術(shù)的基本實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下。
首先，將要進(jìn)行比較的兩種組織或細(xì)胞來(lái)源的mRNA 樣品反轉(zhuǎn)錄為cDNA，把含有目的基因的cDNA 稱為測(cè)試(tester)，把參考cDNA 稱為驅(qū)動(dòng)(driver)，用同一種限制性內(nèi)切酶Rsa I 切割，產(chǎn)生末端平頭的片段，將測(cè)試cDNA 分為兩份，每份連接不同的接頭，即接頭1(adaptor 1)和接頭2(adaptor 2)。接頭為雙鏈DNA 片段，且5'- 端均無(wú)磷酸基，這樣保證只有接頭中的長(zhǎng)鏈可以與cDNA 的5'- 末端連接，兩個(gè)接頭含有可識(shí)別的序列. 接下來(lái)進(jìn)行兩次雜交。**次雜交每個(gè)測(cè)試?yán)锛尤脒^(guò)量驅(qū)動(dòng)，然后變性、退火，根據(jù)雜交動(dòng)力學(xué)**定律，即豐度越高的分子退火速度越快，因此測(cè)試cDNA與驅(qū)動(dòng)cDNA相同片段大都形成異源雙鏈分子，使得差異表達(dá)的單鏈分子得到富集。
**次雜交，將進(jìn)行過(guò)**雜交的兩組樣品不經(jīng)變性而直接混合，只有剩下的經(jīng)過(guò)消減并平均化了的差異表達(dá)的單鏈cDNA 可以重新結(jié)合為新的雜交體分子，這種雜交體分子兩端帶有不同的接頭1和接頭2，加入新鮮變性的驅(qū)動(dòng)進(jìn)行**輪消減雜交，進(jìn)一步富集差異表達(dá)的雜交體分子，并用DNA 酶補(bǔ)平末端，這樣差異表達(dá)的測(cè)試序列- 雜交體分子5'- 和3'- 端就有了進(jìn)行巢式PCR 所需的不同的退火位點(diǎn)。
*后，進(jìn)行兩次PCR 反應(yīng)，**次PCR 只有兩端連接有不同接頭的雙鏈cDNA 片段才得以指數(shù)擴(kuò)增，而其他形式如一端有接頭，而另一端無(wú)接頭的只能線性擴(kuò)增，沒有引物結(jié)合點(diǎn)的不能擴(kuò)增，還有兩端為同一接頭的形成袢狀而無(wú)法獲得指數(shù)擴(kuò)增。利用巢式引物進(jìn)行**次PCR，富集差異表達(dá)的基因片段. PCR 產(chǎn)物可以被直接插入T 載體，或者利用接頭1 上的NotI/SmaI/XmaI 位點(diǎn)和接頭2R 上的EagI 位點(diǎn)進(jìn)行定向克隆，或者接頭與cDNA 連接處的RsaI 位點(diǎn)平端克隆。
然后利用測(cè)序和雜交分析來(lái)分析差異表達(dá)的序列，或者用PCR 產(chǎn)物作探針來(lái)篩選DNA 文庫(kù)。
實(shí)驗(yàn)周期：
一般為40個(gè)工作日，我們會(huì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程通知客戶，確?？蛻粼?*時(shí)間知道實(shí)驗(yàn)進(jìn)展?fàn)顩r。
具有以下顯著優(yōu)點(diǎn)：
 ◇ 操作簡(jiǎn)便，實(shí)驗(yàn)步驟少。只需一輪抑制性差減雜交和選擇性擴(kuò)增差異表達(dá)基因就可以完成實(shí)驗(yàn)，不需要利用物理方法分離單、雙鏈cDNA。
 ◇ 對(duì)稀有轉(zhuǎn)錄本的富集可達(dá)1,000倍以上。在完成差減雜交的同時(shí)平衡轉(zhuǎn)錄本豐度，極大地提高了獲得低豐度差異表達(dá)基因的幾率。
 ◇ 只需2 μg Poly A + RNA。尤其適用于難于獲得RNA的材料。如果只有納克級(jí)的RNA，可以采用 Super SMART? PCR
 cDNA Synthesis Kit 合成高質(zhì)量的cDNA用于PCR-Select? cDNA Subtraction Kit 實(shí)驗(yàn)。